-
實時定量PCR不僅操作簡便、快速高效，而且具有很高的敏感性和特異性。廣泛地運用于分子生物學(xué)的各個領(lǐng)域。實時定量PCR在應(yīng)用中有一些使用人對定量的方法上覺得存在著不容易克服的問題主要包括1.定量的方法與眾多因素有關(guān)，如水、緩沖液、儀器性能等，乃至于核酸的抽提過程都會影響到結(jié)果的穩(wěn)定性。2.標(biāo)準(zhǔn)品的穩(wěn)定保存很難獲得成功，高濃度的核酸物質(zhì)易于被降解，而每次配制新的標(biāo)準(zhǔn)品又會增加批間差異。3.每次測定樣本都要同時測定標(biāo)準(zhǔn)品，而熱循環(huán)儀的樣本孔有限，所以在單批內(nèi)不能測定更多的樣本，這樣...
查看更多
-
凍干熒光PCR試劑凍干方法是將熒光PCR試劑經(jīng)過預(yù)凍，在真空狀態(tài)下進(jìn)行升華，后可制備成凍干粉。凍干熒光PCR試劑時，選用的反應(yīng)管在做凍干時有許多不足之處：1.由于反應(yīng)管呈上寬下窄的錐字形，還需要借助其他工具支撐，這樣反應(yīng)管試劑與凍干機(jī)擱板的接觸面積很小，升華時傳熱會受到限制，延長了預(yù)凍和升華的時間，反應(yīng)管中的凍干程序一般在24～30小時，凍干制品日產(chǎn)量很低。2.反應(yīng)管中的凍干，在加入凍干混合試劑后，需要進(jìn)行離心處理，排出氣泡，并將粘附在反應(yīng)管壁上的試劑離心下來。3.反應(yīng)管中的...
查看更多
-
熒光定量PCR的效率值可通過標(biāo)準(zhǔn)曲線獲取。理想的反應(yīng)效率為100%。效率較高（高于110%）一般說明反應(yīng)過程中存在抑制作用。引起抑制作用的原因主要是RAN或者DNA質(zhì)量較差，模板濃度過高及含有核酸鈍化的殘余物。反應(yīng)效率較低（低于90%）的原因有試劑濃度不適（主要是引物、鎂、Taq、DNA、聚合酶、尤其是在多重試驗中）。造成效率低的其他因素有引物Tm之間的差異超過5℃或者是熱循環(huán)條件不適。抑制作用和較低的效率會影響分析的靈敏度，導(dǎo)致動態(tài)范圍減小及通用性降低。怎樣解決呢？可在做凍...
查看更多
-
熒光PCR凍干芯片的制備方法簡單快速，易于操作，縮短凍干所需時間，一般可在八小時內(nèi)完成凍干步驟。熒光PCR凍干芯片的制備方法示例,1.先要稱取制備凍干保護(hù)劑如海藻糖、棉子糖、右旋糖酐、甘油、焦磷酸二乙酯處理過的水，置于容器中混合均勻，然后加熱至*溶解，在放入2～8℃冷卻。2.預(yù)混熒光定量PCR試劑如將PCR反應(yīng)緩沖液、引物、探針、dNTPs和DNA聚合酶混合均勻；將預(yù)混的熒光定量PCR試劑和凍干保護(hù)劑混合均勻（體積比為3:1），制備成凍干試劑；取5～8μL的凍干試劑點在微流控...
查看更多
-
凍干對熒光探針和熒光染料有防護(hù)作用，凍干可防止探針和染料降解，提高反應(yīng)的靈敏度和特異性。接著介紹一下熒光探針和熒光染料的特性。熒光探針是PCR擴(kuò)增時在加入一對引物的同時加入熒光探針，探針完整時，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。熒光染料是在PCR反應(yīng)體系中，加入...
查看更多
-
單效外循環(huán)濃縮器對溶液進(jìn)行蒸發(fā)濃縮時，在中藥提取、生物醫(yī)藥產(chǎn)品的提取過程中應(yīng)用尤其之多。單效濃縮器應(yīng)用于化工、醫(yī)藥、廢水處理行業(yè)中，批量小，品種多的真空濃縮過程中。單效外循環(huán)濃縮器原理是利用外加熱自然循環(huán)與真空負(fù)壓蒸發(fā)結(jié)合的方式，將溶液進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，將溶劑和溶液進(jìn)行分離。生蒸汽進(jìn)入加熱室，將料液加熱上升，從噴管噴入蒸發(fā)室，進(jìn)行氣液分離，其料液從循環(huán)管回到加熱室下部再進(jìn)行加熱，料液受熱后又噴入蒸發(fā)室開成循環(huán)。當(dāng)進(jìn)入的料液濃縮到一定程度，自控儀表檢測反饋后，由出料口出料，蒸發(fā)室蒸...
查看更多
-
制品在凍干過程中的升華干燥，分為一次干燥和二次干燥。一次干燥的要點，當(dāng)凍干箱內(nèi)的壓力降到60Pa（根據(jù)制品特點而定）以下，就可以給制品加熱，為制品升華提供能量，制品升華的速度由加熱能力和冷阱的捕水能力而定。但凍干箱的壓力必須維持在允許的高壓力以下，板層的溫度在一次升華不要超過共溶點。可以通過以下現(xiàn)象斷定一階段干燥結(jié)束：1.干燥層和凍結(jié)層的交界面到達(dá)瓶底并消失。2.產(chǎn)品溫度上升到接近板層的溫度。3.凍干箱的壓力且維持不變。上述現(xiàn)象發(fā)生后，至少再延長0.5~1小時，以*除制品中的...
查看更多
-
制藥凍干機(jī)要具備安全性、可靠性、適用性。在選擇制藥凍干機(jī)時要滿足以下幾點性能要求。1.凍干機(jī)箱體內(nèi)部要采用大圓角設(shè)計，表面采用鏡面拋光，箱體底部采用傾角設(shè)計，要符合FDA及GMP要求。2.冷阱要采用外置盤管，冷阱內(nèi)要光亮*，避免二次污染及交叉污染。3.要采用立式冷阱快速的熱水浸泡除霜，縮短間歇時間。4.干燥箱與冷阱要采用分體式結(jié)構(gòu)，實現(xiàn)無菌隔離。5.系統(tǒng)密封性要好，極限真空度要≤1Pa。6.系統(tǒng)要有低溫進(jìn)箱、二次回凍（反復(fù)預(yù)凍）、自動進(jìn)氣和壓塞、低溫出箱的功能。7.要有回填控...
查看更多
